Abstract Listeria monocytogenes is a gram-positive bacterium that can survive in food production environments and food products. This microorganism is associated with listeriosis, a serious infection caused by the consumption of contaminated food. The aim of this study was to conduct an integrative literature review on the regulation of L. monocytogenes in food in Brazil, its occurrence and methodologies used for identification in studies published from 2001 to 2021, and the epidemiological surveillance of cases of infection. The current regulations for L. monocytogenes prohibit ready-to-eat foods of more than 102 per gram or milliliter. Officially, only two cases of outbreaks have been identified in the Epidemiological Surveillance of Foodborne Diseases system; however, the circulation of L. monocytogenes was observed in foods of different origins, with occurrence ranging from 3.1 to 48.7. The most commonly used identification method was ISO 11290. The isolation and identification methods for this pathogen are expensive and laborious, making it difficult to implement these methodologies in many laboratories. This scenario contributes to the underreporting of cases of listeriosis and therefore represents a risk for the population that is exposed to potentially contaminated food.

Resumo Materiais de referência são ferramentas indispensáveis para a garantia da qualidade laboratorial. São amplamente utilizados no controle interno da qualidade de ensaios analíticos e na validação de metodologias, e como itens de ensaio em ensaios de proficiência. Materiais de referência microbiológicos são representados principalmente por cepas de referência, cuja utilização como controle interno de ensaios é inquestionável e recomendada por vários manuais microbiológicos. No Brasil, a prática de produção de materiais de referência microbiológicos avançou, nos últimos anos, no desenvolvimento de materiais específicos para ensaios de proficiência. O mesmo não ocorreu com estudos relacionados ao estabelecimento de cepas de referência, por falta de políticas de incentivo, mantendo a dependência do país no uso de cepas de referência internacionais. Este artigo tem como objetivos ressaltar a importância do uso de materiais de referência microbiológicos no controle da qualidade laboratorial e discutir a necessidade do desenvolvimento desses materiais no Brasil. O presente trabalho apresenta uma breve explicação sobre materiais de referência microbiológicos e aponta questões sobre a dependência do país na aquisição de materiais biológicos internacionais. Descreve os padrões de qualidade relacionados à produção desses materiais e a situação das coleções de cultura e dos laboratórios de referência brasileiros que fornecem cepas de referência. Este estudo menciona também recomendações práticas sobre subcultivos de cepas de referência.

Abstract Reference materials are crucial for laboratory quality assurance. They are widely used for the internal quality control of analytical tests, in the validation of methodologies and as test items in proficiency tests. Microbiological reference materials are represented mainly by reference strains, whose use in laboratory internal quality control is unquestionable and recommended by several microbiological manuals. In Brazil, the practice of producing microbiological reference materials has advanced in recent years in the development of specific materials for proficiency testing. However, the same did not occur with the establishment of reference strains due to a lack of incentive policies, maintaining the country dependant on the use of international reference strains. This article aims to emphasize the importance of the use of microbiological reference materials in laboratory quality control and discuss the need for the development of such materials in Brazil. The paper presents a brief explanation of microbiological reference materials and points out questions concerning the country’s dependence on the acquisition of international biological materials. It also describes quality standards related to the production of these materials and the situation of culture collections and Brazilian reference laboratories that supply reference strains. The study also mentions practical recommendations on the subcultures of reference strains.

Resumo Cronobacter é uma bactéria oportunista, associada a infecções em neonatos devido ao consumo de fórmulas infantis desidratadas. Atualmente, sabe-se que Cronobacter pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, sendo, em idosos, a sua maior prevalência, e a infecção urinária, a síndrome mais comum neste grupo. A identificação de fórmulas infantis desidratadas como veículo de contaminação em casos de meningite causada por Cronobacter em neonatos levou as agências de regulação a criarem medidas específicas para o controle destes patógenos nestes produtos. Uma revisão bibliográfica foi realizada sobre a epidemiologia das infecções por Cronobacter, a ocorrência do patógeno e a regulação na área de alimentos no Brasil. Constatou-se que casos de infecções foram reportados no país no período de 1997-2013, com maior ocorrência em neonatos. O número preciso de casos não pôde ser determinado e, em alguns dos relatos, a identificação fidedigna dos micro-organismos pode ser questionável. Na maioria dos casos relatados o veículo de contaminação não foi investigado ou não pôde ser determinado. Já ocorreram relatos da contaminação de amostras de fórmulas infantis desidratadas comercializadas no Brasil por Cronobacter, mas sua ocorrência parece ter sido reduzida após a adoção de medidas sanitárias mais rígidas pelos órgãos reguladores. Cronobacter também foi isolada de temperos e condimentos, farinhas, queijo e misturas de cereais para crianças; destas amostras, quatro espécies foram identificadas: C. sakazakii, C. malonaticus, C. dublinensis e C. muytjensii. A presença do patógeno em diferentes classes de alimentos é preocupante pois pode representar um risco caso sejam consumidos por indivíduos pertencentes a algum grupo de risco (neonatos e idosos). O incentivo à realização de pesquisas sobre a epidemiologia do gênero Cronobacter é importante para identificar as classes de alimentos que podem atuar como veículo de contaminação e a real prevalência das infecções no Brasil.

Abstract Cronobacter is an opportunistic bacterium associated with infections in newborns due to the consumption of powdered infant formulae. It is now known that Cronobacter can cause infections in individuals of any age with a higher prevalence in the elderly, urinary infections being the most common syndrome in this group. The identification of powdered infant formulae as the contamination vehicle in cases of meningitis caused by Cronobacter in neonates led the regulatory agencies to establish specific measures to control such pathogens in these products. Thus a literature review was carried out concerning the epidemiology of Cronobacter infections, the occurrence of the pathogen and food regulations in Brazil. It was found that cases of the infection were reported in Brazil from 1997-2013, with a higher occurrence in neonates. The precise number of cases could not be determined, and in some reports, identification of the microorganism was questionable. In most of the cases reported the contamination vehicle was not investigated or could not be determined. There have been reports of contamination by Cronobacter in samples of powdered infant formulae commercialized in Brazil, but their occurrence seems to have reduced after the adoption of stricter sanitary measures by the regulatory agencies. Cronobacter has also been isolated from spices and herbs, flours, cheese and from cereal mixes destined for children; and from these samples, four species were identified: C. sakazakii, C. malonaticus, C. dublinensis and C. muytjensii. The presence of the pathogen in different types of food is worrying because it may represent a risk if consumed by individuals belonging to one of the risk groups (neonates and elderly). It is important to encourage research about the epidemiology of the genus Cronobacter in order to identify the classes of food that can act as contamination vehicles and the real prevalence of infections in Brazil.

Abstract This study aimed to evaluate the elution-concentration methodology based on skimmed milk flocculation from three varieties of tomatoes (Solanum lycopersicum L. [globe], Solanum lycopersicum var. cerasiforme [cherry] and hybrid cocktail [grape tomato]) for further monitoring of field samples. Spiking experiments were performed to determine the success rate and efficiency recovery of human norovirus (NoV) genogroup II, norovirus murine-1 (MNV-1) used as sample process control virus and human adenovirus (HAdV). Mean values of 18.8%, 2.8% and 44.0% were observed for NoV GII, MNV-1 and HAdV, respectively with differences according to the types of tomatoes, with lower efficiency for cherry tomatoes. Analysis of 90 samples, obtained at commercial establishments in the metropolitan region of Rio de Janeiro State, revealed 4.5% positivity for HAdV. Bacterial analysis was also performed with no detection of Salmonella spp., L. monocytogenes and fecal coliforms. Data demonstrated that the skimmed milk flocculation method is suitable for recovering HAdV from tomatoes and highlights the need for considering investigation in order to improve food safety.

O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de biofilme e o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Pseudomonas aeruginosa isoladas na avaliação da qualidade microbiológica de 80 amostras de águas minerais naturais comercializadas em garrafões de 20 L. Foi realizada a quantificação de P. aeruginosa e enterococos; a pesquisa de coliformes totais, coliformes termotolerantes e de clostrídios sulfito redutores (CSR). A produção de biofilme de P. aeruginosa foi avaliada em caldo infusão cérebro-coração (BHI) e em água mineral natural estéril nas temperaturas de 25 e 35ºC por 24 e 48 h. A avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos foi realizada pelo teste de difusão em ágar (Kirby-Bauer). De 80 amostras analisadas, 40 (50%) apresentaram qualidade microbiológica insatisfatória segundo a RDC nº275/05. Trinta e oito (47,5%) amostras apresentaram P. aeruginosa, nove (11,2%) coliformes totais, quatro (5,0%) CSR e uma (1,2%) coliformes termotolerantes. Nenhuma amostra apresentou contaminação por enterococos. Dezesseis cepas (51,6%) de P. aeruginosa foram classificadas como não aderentes ou fracamente aderentes, tanto no BHI quanto na água mineral. Contudo, cinco cepas (16,1%) apresentaram-se fortemente aderentes nas duas matrizes, principalmente no caldo BHI e na temperatura de 25ºC. Cepas resistentes ou com resistência intermediária a antibióticos da classe dos aminoglicosídeos e/ou β-lactâmicos foram isoladas neste estudo. Concluiu-se que os isolados de P. aeruginosa foram capazes de produzir biofilme nas matrizes estudadas e apresentaram resistência a antimicrobianos. Metade das amostras apresentou qualidade microbiológica insatisfatória, principalmente devido à contaminação por P. aeruginosa (47,5%).

This study evaluated biofilm formation and antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa isolated to evaluate the microbiological quality of 80 natural mineral water samples sold in 20 L bottles. The quantity of P. aeruginosa and enterococci was assessed, including total coliforms, thermotolerant coliforms and sulfite-reducing clostridia (SRC). Biofilm production from P. aeruginosa was evaluated in brain heart infusion broth (BHI) and sterile natural mineral water at temperatures of 25 and 35ºC for 24 and 48 h. Antimicrobial susceptibility tests were performed using the agar diffusion method (Kirby-Bauer). Of the 80 samples analyzed, 40 (50%) presented unsatisfactory microbiological quality according to RDC no. 275/05. Thirty-eight (47.5%) samples presented P. aeruginosa, nine (11.2%) total coliforms, four (5.0%) SRC and one (1.2%) thermotolerant coliform. Sixteen P. aeruginosa strains (51.6%) were classified as non-adherent or weakly adherent, both in BHI as in mineral water. However, five strains (16.1%) were strongly adherent in the two matrices, mainly in BHI at the temperature of 25ºC. The study also isolated resistant or intermediate resistant strains to antibiotics of aminoglycosides and/or β-lactams classes. It was concluded that P. aeruginosa isolates were able to produce biofilm in the studied matrices and presented resistance to antimicrobials. Half of the samples presented unsatisfactory microbiological quality, mostly due to P. aeruginosa contamination.

A NBR ISO/IEC 17025:2005, uma das normas mais utilizadas em laboratórios de ensaio, descreve como um de seus critérios para a garantia da qualidade dos resultados analíticos a participação periódica dos laboratórios em ensaios de proficiência (EP). Os analitos, utilizados nos EP são materiais de referência (MR) provenientes de um mesmo lote, e devem apresentar características de homogeneidade e estabilidade. O objetivo deste estudo foi produzir um MR qualitativo destinado ao ensaio de pesquisa de Listeria monocytogenes em matriz queijo pela técnica de liofilização. Para a produção do MR, foi utilizado como matriz o queijo Minas frescal (QMF) ultrafiltrado. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo e submetida à liofilização, tendo a sacarose como crioprotetor. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável na temperatura de ≤-70°C durante todo o período estudado (10 meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35°C por quatro dias e a -20°C por 48 dias, e os resultados estatísticos indicam tendência à estabilidade. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um EP à temperatura máxima de 35°C por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular nesse período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo L. monocytogenes em matriz queijo.

The standard most used in testing laboratories, ISO/IEC 17025:2005, describes the participation of laboratories in periodic proficiency testing (PT), as a criteria for quality assurance of analytical results. The analyses used in PT are reference materials (MR) from the same lot, and must have characteristics of homogeneity and stability. This study aimed to produce a qualitative RM for detection of Listeria monocytogenes assays in cheese matrix. For the production of RM, Minas Frescal cheese (MFQ) was used as matrix. The matrix was distributed in flasks, contaminated with the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as cryoprotector. The RM produced was considered homogeneous and stable at -70°C during the entire period of study (10 months). The material showed stability at 4, 25, 30 and 35°C for 4 days and at -20°C the RM showed stability for 48 days, and the statistical results indicate a tendency to maintain stability. It was concluded that the material showed all the requirements of an RM quality and could be transported to the laboratory participants of a PT at 35°C up to 4 days, since the results indicate the maintenance of cell concentration during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing L. monocytogenes in cheese matrix.

O uso de materiais de referência (MR) é uma das principais ferramentas utilizadas para garantia e controle da qualidade de laboratórios de microbiologia de alimentos. No Brasil, a RDC n.º 12/01 da Anvisa prevê como um dos parâmetros para a avaliação da qualidade de queijos a enumeração de estafilococos coagulase positiva (ECP). O grande desafio na produção de MR destinados a ensaios microbiológicos é a instabilidade natural dos micro-organismos, o que dificulta o desenvolvimento e a manutenção desses MR. O objetivo deste estudo foi produzir um MR quantitativo destinado ao ensaio de enumeração de ECP em matriz queijo. Uma amostra de queijo ultrafiltrado com contagem de ECP <10 UFC/g e número de aeróbios viáveis de 1,22 × 10³ UFC/g foi utilizada como matriz para produção do MR. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo em concentração específica e submetida à liofilização. Como crioprotetor, foi utilizada sacarose. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável à temperatura < -70 ºC durante todo o período estudado (dez meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35 ºC durante quatro dias; contudo, os resultados indicam que, a 35 ºC, ocorre um decréscimo na concentração celular. A -20 ºC, o MR apresentou-se estável durante 48 dias. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um ensaio de proficiência a temperaturas de até 35 ºC por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular neste período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo ECP em matriz queijo.

The use of reference materials (RM) is one of the principal tools used for assurance and quality control in food microbiology laboratories. In Brazil, Anvisa RDC nº 12/01 specifies the enumeration of coagulase-positive staphylococcus (CPS) as one of the parameters for evaluating cheese quality. The main challenge in the production of RM destined for microbiological assays is the natural instability of the microorganisms, which makes it difficult to develop and maintain them. This study aimed to produce a quantitative RM for use in enumeration assays of CPS in cheese matrixes. A sample of an ultra-filtered cheese with a CPS count of <10 CFU/g and a total nº of viable aerobes of 1.2 × 10³ CFU/g was used as the matrix to produce the RM. The matrix was distributed in flasks, contaminated with specific concentrations of the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as the cryo-protector. The RM produced was considered homogeneous and stable at < -70ºC during the entire study period (10 months). The material was shown to be stable at 4, 25, 30 and 35 ºC for 4 days, although the results indicated a decrease in cell concentration at 35 ºC. At -20 ºC the RM was stable for 48 days. It was concluded that the material showed all the necessary requirements for a quality RM and could be transported to the laboratories taking part in a proficiency test at up to 35 ºC for up to 4 days, since the results indicated maintenance of the cell concentrations during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing CPS in a cheese matrix.